مناقشة اطروحة دكتوراه في قسم علوم الحياة

أطروحة دكتوراه في قسم علوم الحياة تناقش إنتاج وتوصيف إنزيمCytosine deaminase من خميرة الخبز Saccharomyces cerevisiae وتحديد تطبيقاته البيولوجية للطالبة منى عبد مطر

في الدراسة الحالية استخلص إنزيم السايتوسين دي امينيز ونقي بعدة مراحل لعدة انواع من خميرة الخبز الجاهزة Saccharomyces cerevisiae وهي فطريات تنتمي الى شعبة الفطريات الكيسية وتم تحديد الظروف المثلى لفعالية ثبات الانزيم المنقى. وبسبب الاهمية البيولوجية للخميرة والانزيم تم التحري عن الفعالية الحيوية للانزيم في كافة مراحل التنقية ودراسة خصائصه كمضاد فطري لبعض انواع الفطريات الممرضة، وكذلك التحري عن فعاليته كمثبط لنمو خلايا نوعين من الخطوط الخلوية السرطانية: سرطان الرئة A549 وسرطان الثدي MDA  عند المعاملة  لمدة 24 ومقارنة تأثيره السمي على الخلايا الطبيعية متمثله بخلايا الجرذ الليفية REF. كما شملت الدراسة التحري عن تأثيره في تعزيز المناعة من خلال تعريض الخلايا اللمفاوية البشرية الطبيعية لعدة تراكيز من الانزيم في كافة مراحل لتنقيته.

فقد تم استخلاص إنزيم السايتوسين دي امينيز من خميرة الخبز الجاهزة لأنواع مختلفة متوفره في السوق المحلية شملت: الخميرة التركية المنشأ T الإيرانية Ir الروسية R بالإضافة إلى المحلية تمثل خميرة الخبز العراقية Iq . فقد تم تعريض حوالي 100 غرام من كل من الأنواع قيد الدراسة الى50 مل تولوين كمذيب عضوي لتحطيم جدار خلية الخميرة، مع تسخين في حمام مائي عند درجة حرارة 45 درجة مئوية لمدة ساعة حيث تم نقل الخليط المبرد إلى قمع الفصل وأضيف 100 مللتر ماء مقطر مبرد مع الرج. تم حضن الخليط عند 4 درجات مئوية لمدة 18 ساعة ليتم نبذها مركزيا ثم إخضاع الراشح لخطوات تنقية مختلفة للإنزيم بما في ذلك ترسيب بالملح، وتنقية التبادل الأيوني وعمليات الترشيح الهلامية

تم التحقق من درجة نقاوة الانزيم في مراحل التنقية بإستخدام طريقة الترحيل الكهربائي لذا رحلت ثلاث نماذج تعود الى المستخلص الخام للانزيم والانزيم المنقى من عمليتي التبادل الأيوني والترشيح الهلامي وكانت النتيجة ظهور عدة حزم في نموذج المستخلص الخام بينما أظهر الانزيم المنقى بصورة كاملة

توصلت الباحثة الى نتائج المقارنة في بنك الجينات أن الجين المدروس وفي كل أنواع الخميرة المدروسة حدثت به طفرات (تغايرات) في القواعد النتروجينية المدروسة ويدل هذا على أنه تسجيل جديد ولأول مرة بسبب الطفرات الموجودة في القواعد النتروجينية، وبعد إكمال تحليل تسلسلات القواعد النتروجينية للعينات قيد الدراسة سُجلت هذه التسلسلات في بنك الجينات الأمريكي وتم منح أرقام انضمام تعريفية لهذه البيانات، ولعدم وجود دراسات تطبيقية لانزيم السايتوسين دي أمينيز المستخلص من خميرة الخبز على الفطريات تعد هذه الدراسة الاولى على مستوى العراق والوطن العربي.